技術(shù)文章
嚙齒類動物顯性致死試驗(yàn)儀
嚙齒類動物顯性致死試驗(yàn)儀
一、 儀器介紹
實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>
本試驗(yàn)是一項(xiàng)生殖細(xì)胞致突變試驗(yàn),用來檢測受試物對整體哺乳動物生殖細(xì)胞的遺傳損傷,進(jìn)一步確證體外試驗(yàn)或其他試驗(yàn)系統(tǒng)獲得的陽性結(jié)果,以評價受試物能否引起顯性致死突變。
實(shí)驗(yàn)概述：
哺乳動物發(fā)育中的精子在物理或化學(xué)因素作用下,發(fā)生染色體損傷,從而使受精卵在發(fā)育中死亡引起顯性致死的染色體損傷主要為染色體斷裂。顯性致死的主要表現(xiàn)是受精卵著床前丟失或著床后胚
胎早期死亡。通過適當(dāng)?shù)耐緩绞剐坌詣游锝佑|受試物,然后與未經(jīng)染毒且未交配過的雌性動物交配,交配結(jié)束后,取出雌性動物。雌性動物于妊娠后半期處死,剖開腹腔,取出子宮,檢査兩側(cè)子宮內(nèi)的胚胎植入數(shù)(著床數(shù))、早死胎、晚死胎和活胎數(shù)。雄性動物每間隔一定時間再與另一批未經(jīng)染毒且未交配過的雌性動物交配,如此共進(jìn)行數(shù)批,以保證覆蓋一個精子周期。
應(yīng)用范圍
應(yīng)用于科研、農(nóng)業(yè)、衛(wèi)生、教育、霧霾狀態(tài)可吸入顆粒染毒效果研究等各個領(lǐng)域
二、試驗(yàn)流程
1）實(shí)驗(yàn)動物：
物種: 通常選用性成熟的健康雄性大鼠或小鼠(如SD大鼠、CD-1小鼠)
數(shù)量: 每組至少15只雄鼠，設(shè)多個劑量組和陰性/陽性對照組。
雌鼠: 需未交配過的健康雌鼠，用于與雄鼠交配。
2）給藥劑量分組:
至少設(shè)3個劑量組，高劑量應(yīng)出現(xiàn)輕微毒性(如體重減輕)。
陰性對照組如體重減輕(溶劑對照)和陽性對照組
給藥方式:通常為經(jīng)口灌胃，連續(xù)給藥5~7天(覆蓋精子發(fā)生周期不同階段)
3）交配程序
交配安排:雄鼠給藥后，按周次與未處理雌鼠交配(每周更換一批雌鼠，共5~6批)，以覆蓋精子發(fā)生全周期(精原細(xì)胞一精子)。
交配比例:通常1雄:2雌，每日檢查陰栓(交配證據(jù))
4）觀察指標(biāo)：
胚胎存活分析
雌鼠妊娠中期解剖，計數(shù)黃體數(shù)、著床數(shù)、活胎數(shù)和死胎數(shù)。
計算顯性致死率:
其他指標(biāo): 雄鼠體重、睪丸重量、精子質(zhì)量等,
5）結(jié)果評價：
陽性結(jié)果:顯性致死率顯著升高(如劑量依賴性增加，或某批交配周期異常)，提示受試農(nóng)藥可能誘發(fā)生殖細(xì)胞遺傳損傷。
陰性結(jié)果:需結(jié)合其他遺傳毒性試驗(yàn)綜合評估
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